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  • 原位雜交儀實驗要求及步驟

    根據探針的標記物是否直接被檢測,原位雜交儀又可分為直接法 和間接法兩類。直接法主要用放射性同位素、熒光及某些酶標記的探針與靶核酸進行雜交,雜交后分別通過放射自顯影、熒光顯微鏡術或成色酶促反應直接顯示。間 接法一般用半抗原標記探針,最后通過免疫組織化學法對半抗原定位,間接地顯示探針與靶核酸形成的雜交體。

    基本要求組織取材:組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,所以新鮮組織和培養細胞最好在30min內固定。

    固定目的是:(1)保持細胞結構;(2)最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平;(3)使探針易于進入細胞或組織。最常用的固定劑是多聚甲醛,與其它醛類固定劑(如戊二醛)不同,多聚甲醛不會與蛋白質產生廣泛的交叉連接,因而不會影響探針穿透入細胞或組織。


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